21 学术座谈会（下） (3-2)

“确实，基因编辑分为四种，其一，巨型核酸酶，众所周知，常用的限制酶在切割DNA方面是有效的，但它们通常在多个位点进行识别和切割，特异性较差，而巨型核酸酶是最特异的天然存在的核酸酶，所以它也是四种方法中效率最差的，受到其DNA结合元件和切割元件制约，它在每1，000个核苷酸中才能识别一个潜在的靶标，而且这种方法的精确度都是不可预测的。显然，基因能量公司不会选择这种办法。”

“其二，锌指核酸酶，锌指核酸酶是一个经过人工修饰的核酸酶，它通过将一个锌指DNA结合结构域与核酸酶的一个DNA切割结构域融合而产生。通过设计锌指结构域就可以实现对目的基因的特定DNA序列的靶向切割，这也使得锌指核酸酶能够定位于复杂基因组内的独特的靶向序列。通过利用内源DNA修复机制，锌指核酸酶可用于精确修饰高等生物的基因组。ZFN也就是锌指核酸酶，虽然克服了巨型核酸酶的局限性，在每140个核苷酸中可有一个识别位点，但因为DNA结合元件的相互影响，ZFN同巨型核酸酶差别不大，两种方法的精确度都是不可预测的。”

“其三，转录激活样效应因子核酸酶，简称TALEN，TALEN是经过基因工程改造后的可以切割特定DNA序列的限制酶。TALEN是通过将一个TAL效应子DNA结合结构域与核酸酶的一个DNA切割结构域融合而获得的。TALENs可以被设计成与几乎任何所需的DNA序列结合，因此当与核酸酶结合时，DNA可以在特定位置进行切割。TALEN比前两种方法更高效，而且准确率也是所有方法中最高的，但遗憾的是，TALEN只能针对特定的DNA进行切割，所以这导致其成本太高。”

“最后一种方法，那就是成簇规律间隔短回文重复技术，CRISPR-Cas是原核生物免疫系统，赋予原核生物对如存在于质粒和噬菌体中的外来遗传物质的抗性，是一种获得性免疫系统，携带间隔序列的RNA有助于Cas蛋白识别并切割外源致病DNA。其它RNA指导的Cas蛋白切割外源RNA，CRISPR核酸酶相比TALEN的精确度略低，但它确有一个其他三种方法都不具备的优势，那就是可以使用其~8RNA直接定位不同的DNA序列，以此可大大节约成本的同时，还能大大提高时效性。所以，如果我是基因能量公司高层，肯定会选择成簇规律间隔短回文重复技术。”

就在秦然讲解的时候，不少生物基因学暗暗点头，他们听得出，秦然不是说大话，他真的自学过生物基因学，并且在生物基因学上的造诣不低，水平至少和生物基因学一级高工持平。因为随便去拉十个普通生物基因学的研究人员，恐怕有九个都不能将基因编辑的四种方法阐述清楚。

但秦然的讲解还没有结束。

“相比巨型核酸酶和锌指核酸酶，CRISPR-Cas的精确度已经很高了，但脱靶效应仍然是基因编辑中最大的副作用......”

此时有专家打断秦然：

“CRISPR-Cas9技术发明人之一詹妮弗·杜德纳三年前已经证实，抗 CRISPR蛋白能将 CRISPR导致的脱靶效应降低四分之一，其中“AcrllA4”的蛋白甚至能将脱靶效应发生率减少 4倍，而整个过程中目标位点的基因编辑没有受到丝毫影响，还有”

秦然不紧不慢抢过话头：“你是想说去年3月18日，约瑟夫·邦迪-德努米团队在李斯特细菌中发现了 4种能够阻断 CRISPR-Cas9活性的蛋白质，其中包括 AcrllA4蛋白。4月25日，他们团队又在从一种脑膜炎细菌中发现了另 3种这类蛋白质。”

“额！”被打断话的专家一愣，秦然说的，好像真是他准备说的。

等等，感觉哪里不对，是了，你一个机械类的科研人员，关注生物基因技术干嘛，这不是抢饭碗嘛，难道要逼着我们搞生物基因的去学机械？

秦然继续说下去。

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